PROTOCOLO DE EXTRAÇÃO DE DNA GENÔMICO DE ERVILHA

Para essa atividade serão necessários os seguintes materiais:

1-     Detergente de cozinha;

2-     Sal de cozinha (NaCl);

3-     Álcool;

4-     Copos descartáveis de 50mL (cafezinho);

5-     Colheres de chá descartáveis;

6-     Recipiente para macerar o tecido;

7-     Tecidos vegetais (banana, cebola ou morango);

8-     Bastão de vidro;

9-     Funil;

10-   Pano “Perfex”.

Solução de extração:

·         Prepare a solução em um copinho de café.

·         Prepare uma solução contendo duas colheres de chá bem cheias de detergente, meia colher de chá de sal de cozinha e complete o voluma do copinho de café com água ( +/- 50 mL de água, um copo de cafezinho cheio). Misture bem até a completa dissolução dos materiais.

Procedimentos:

Macere o tecido vegetal até formar uma massa homogênea. Em seguida, adicione a “Solução de extração” ao material macerado até atingir a consistência de uma papa rala. Continue macerando por mais 2 minutos para que o DNA entre em solução. Após esse período, filtre o material com o auxílio do pano “Perfex” e o funil e colete a parte aquosa. Para obter o DNA, adicione à parte aquosa previamente purificada, duas vezes o volume correspondente de álcool (Ex: se após a filtração for obtido um volume correspondente a meio copo de cafezinho (25 mL), adicione um copo de cafezinho cheio (50 mL de álcool). O álcool faz com que o DNA saia de solução, formando um aglomerado. Em solução, ao contrário do DNA encontrado no núcleo das células, o DNA está completamente distendido. Por esse motivo, após a adição do álcool, as moléculas de DNA desenovelado (como linhas esticadas) se embolam formando grumos. Assim, durante a precipitação alcoólica observa-se o aspecto fibroso do DNA, que pode ser retirado da solução com o auxílio de um bastão de vidro. O produto assim obtido pode ser utilizado para diversos estudos.